期刊简介

本刊是由中华人民共和国卫生部主管、中国疾病预防控制中心主办的国家级杀虫、灭鼠、防治病媒传染病的专业期刊。是中华预防医学会系列杂志之一,已连续3年被美国化学文摘(CA)收录,是预防医学、卫生学类核心期刊。

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  • 杂志名称:中国媒介生物学及控制杂志
  • 主管单位:中国鼠类防制杂志
  • 主办单位:中华人民共和国卫生部
  • 国际刊号:13-1142/R
  • 国内刊号:10-1522/R
  • 出版周期:双月刊
期刊荣誉:2002年荣获中华预防医学会优秀期刊期刊收录:万方收录(中), 维普收录(中), 知网收录(中), 哥白尼索引(波兰), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 文摘杂志, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), Pж(AJ) 文摘杂志(俄)
中国媒介生物学及控制杂志2014年第04期

医学媒介生物微量组织直接扩增DNA条形码序列方法的研究

胡佳;岳巧云;邱德义;吴可量;刘德星;汪小东;魏晓雅;陈健;廖俊蕾

关键词:免提取, 医学媒介生物, 微量组织, DNA条形码
摘要:目的 为保证DNA条形码序列模板DNA来源的单一性,和大程度减少凭证标本的形态破坏,建立一种从医学媒介生物微量组织中免提取,直接扩增DNA条形码序列的方法.方法 以螨、蚤、蜱单个个体以及小至蝇类后足1/5跗节的组织块为材料,通过优化裂解液浓度、裂解液和缓冲液配比,优化反应体系和反应条件,用KOD FX DNA聚合酶进行DNA条形码序列的直接扩增,反应产物测序,与NCBI基因库中的序列进行比较以验证其是否被污染.结果 裂解液优化为NaOH 50 mmol/L;裂解液和缓冲液配比优化为9∶1;反应体积优化为每50μl反应体系中2×KOD FX DNA聚合酶buffer(含Mg2+)25 μl、2 mmol/L dNTP 10 μl、KOD FX DNA聚合酶(1 U/μl)lμl、正向引物LCO1490(20 μmol/L)、反向引物HCO2198(20 μmol/L)各1μl;反应条件优化为:95℃3 min;98℃10s,50℃30 s,68℃1 min,35个循环;68℃7 min.测序结果显示无污染,均为有效序列.结论 该方法操作简单而且省去了DNA提取的步骤,节约了时间和费用,适合螨、蚤、蜱单个个体以及小至蝇类后足1/5跗节的组织块DNA条形码序列的直接扩增.